TNF�拨痢�CD54在肝纖維化家兔肝移植中的表達及意義

【摘要】  目的　　探討腫瘤壞死因子-α（TNF�拨粒�、細胞間粘附分子-1（CD54）在肝纖維化家兔肝移植中的表達及意義。方法　　普通成年家兔30只，隨機分為正常組5只，供體組10只，對照組5只，實驗組10只。實驗組應用四氯化碳（CCl4）法建立肝纖維化動物模型。然后，正常組給予假手術，對照組和實驗組采用原位肝移植手術。術后24h處死所有實驗動物，應用免疫組織化學的方法，檢測各組肝臟組織中TNF�拨痢�CD54的表達。結果　　實驗組TNF�拨痢�CD54的表達均比對照組和正常組明顯增加（P<0.05）；對照組CD54表達比正常組增加（P<0.05）；對照組TNF�拨恋谋磉_與正常組無明顯差異（P＞0.05）。結論　　TNF�拨痢�CD54在肝纖維化家兔肝移植中發揮重要作用，可能影響移植肝臟的損傷修復。

【關鍵詞】  肝移植 肝纖維化 TNF�拨� CD54職稱論文發表網

    ［Abstract］　　Objective　　To study of the expression and its significance of TNF�拨� and CD54 on liver tissue from liver transplantation rabbit with hepatic fibrosis.Methods　　Thirty adult rabbits were divided randomly into four groups,five rabbits were in ten normal group （NG）,ten in the donator,five in the control group （CG）,and ten in the experimental group （EG）.Carbon tetrachloride was injected intraperitoneally to make the hepatic fibrosis model of the rabbit in EG.Then NG was given sham operation,CG and EG were given liver transplantation operation.After operation 24 hours,all of the rabbits were executed,and immunohistochemistry staining was adopted to observe the positive expression of TNF�拨� and CD54 molecular in liver tissue.Results　　The positive expression of TNF�拨� and CD54 molecular in EG were significantly higher than that in NG and CG（P＜0.05）,and the positive expression of CD54 molecular in CG was higher than that in NG （P＜0.05）,but the expression of TNF�拨� in CG was similar as in NG （P＞0.05）.Conclusion　　The positive expression of TNF�拨� and CD54 on liver tissue from liver transplantation rabbit with hepatic fibrosis has important effect,which possibly impacts the reparation of transplanted liver.

    ［Key words］　　liver transplantation;h職稱論文發表網 epatic fibrosis;TNF�拨�;CD54

    　　　　肝移植已成為治療終末期肝病的唯一有效手段，但相對于其他外科手術來說，其風險仍然很大。排斥反應及原發性移植肝無功能已成為肝移植手術失敗的主要原因。目前，國內外的研究方向主要是肝移植后的缺血再灌注損傷及移植排斥反應。本實驗通過建立肝纖維化家兔模型，再施行肝移植，探討肝纖維化家兔血液中的細胞因子對移植肝臟的作用。

    1　　材料與方法

    1.1　　實驗動物及分組　　選取6月齡普通級雄性家兔30只，由青島市藥檢所提供，體重1.75～2.25kg。隨機分為正常組5只，供體組10只，對照組5只，實驗組10只。正常組給予假手術，對照組和實驗組采用原位肝移植手術。在不銹鋼絲籠中飼養，早晚喂顆粒狀飼料（青島市藥檢所提供），中午喂青菜，自由飲用自來水。空氣濕度為50％～70％，溫度為20～29℃。職稱論文發表網

    1.2　　肝纖維化動物模型的建立［1］　　家兔飼養5天后開始造模。將四氯化碳（上海建信化工有限公司試劑廠）溶于菜籽色拉油中搖勻，使濃度為5％。高壓消毒。取四氯化碳按0.1ml/kg行腹腔注射。開始每周一次行腹腔注射；4周后，根據動物的情況每周注射2次，四氯化碳劑量為0.14～0.26ml/kg，濃度為7％～13％。8周后行肝移植手術。

    1.3　　肝移植動物模型的建立　　術前2h禁食，戊巴比妥鈉30mg/kg耳緣靜脈麻醉后，自腹正中切開腹腔，充分游離并顯露左腎動、靜脈。將兩根長12 cm、內徑3mm且充滿肝素鹽水的硅膠管分別由左腎動、靜脈插入腹主動脈及下腔靜脈內，鉗夾游離端，備用。將待灌注的供肝門靜脈及肝下下腔靜脈依次與相應受體兔的腎動、靜脈插管連接（此前結扎供肝的肝動脈及肝上下腔靜脈），解除插管鉗夾，恢復供肝血流［2］。供體組兔肝臟（供肝）的原位灌注及切取按Jamieson等［3］介紹的方法進行。假手術僅做肝臟及周圍血管的游離。

    1.4　　標本取材及染色　　職稱論文發表網 24h后采用空氣栓塞處死動物，切取左外葉肝組織標本。于40g／L多聚甲醛固定液中固定6h。固定后的組織常規浸蠟包埋、連續切片。應用免疫組織化學SABC三步法染色，檢測TNF�拨痢�CD54在各組肝臟組織中的表達，DAB顯色，鏡下控制顯色時間。最后脫水，透明，封片，顯微鏡觀察。

    1.5　　免疫組化測定　　免疫組化染色結果利用美國Sample PCI圖像分析系統進行平均吸光度測定，將免疫組化染色結果轉化為平均吸光度值進行定量分析。每張切片以組織間質空白處入射光的值為定標。每張切片測定5個視野吸光度取平均值，以其作為切片的測定值。切片陽性表達的強弱與吸光度值呈正相關。TNF�拨痢�CD54均表達在染色陽性細胞的胞漿或胞膜呈現程度不同、基本均勻的棕黃色顆粒。

    1.6　　統計學處理　　所有數據均用SPSS 13.0進行統計學分析。取α=0.05為檢驗水準，P<0.05表示差異有顯著性。

    2　　結果職稱論文發表網

    2.1　　病理改變　　大體見正常組家兔肝臟呈鮮紅色，有光澤，質地柔軟；實驗組動物肝臟呈灰白色，無光澤，被膜腫脹,且質地變硬。HE染色可見光鏡下正常組肝細胞呈條索狀排列，形態無明顯改變；對照組肝細胞輕度腫脹，部分細胞呈氣球樣變，主要