YAP在乳腺癌中的表達及其臨床意義

【摘要】  　　目的：探討YAP在乳腺癌組織中的表達及與乳腺癌臨床病理特征的關系及其臨床意義。方法：應用免疫組織化學方法檢測60例乳腺癌組織、26例癌旁正常乳腺組織YAP的表達情況。結果： 60例乳腺癌組織中有20例為陽性，占33.33%，而在26例正常乳腺組織中有25例為陽性，占96.15%。兩組比較，差異有統計學意義(χ2=28.7，P<0.0001)；乳腺癌中YAP的陽性表達與年齡、組織學分級、TNM分期、淋巴結轉移等無明顯關系（P>0.05）。結論：YAP的表達與乳腺癌形成相關，有可能是乳腺癌形成早期的一個標志。

【關鍵詞】  乳腺癌;YAP; 免疫組織化學

　　［ABSTRACT］ Objective:  To study the expression of YAP and its clinical significance in breast carcinoma. Methods: The expression of YAP was detected by immunohistochemistry in 60 breast carcinoma tissues, 20 carcinoma adjacent normal breast tissue. Results:The positive expression of YAP was found in 20/60 (33.33%) of breast carcinoma tissues ,25/26 (96.15%)of carcinoma adjacent normal breast tissue. The positive expression rate of YAP in breast carcinoma tissues was significantly lower than that in carcinoma adjacent normal breast tissue(χ2=28.7，P<0.0001). No significant relationships were observed among the positive expression of YAP and age，histological grade，tumor  with lymph node metastases, TNM stages of the cancer （P>0.05）. Conclusions: YAP may be implicated in the tumorigenesis of breast carcinoma as an early sign.
   
　　［KEY WORDS］ Breast cancer; YAP; Immunohistochemistry

　　YAP(Yes—assoeiatedprotein)即Yes相關蛋白，是一種連接蛋白和轉錄共激活因子，在正常機體細胞內發揮著信號轉導和基因轉錄調節的作用。近年研究發現，YAP是Hippo通路中的靶因子，該通路通過抑制YAP的活性調控細胞增生和凋亡間平衡，抑制組織細胞過度生長。YAP的表達增高、活性增強促進了腫瘤的發生和發展，提示其潛在的致癌性。我們通過對乳腺癌手術標本進行YAP抗體的免疫組化觀察, 對YAP在乳腺癌中的表達與臨床病理特征的關系進行探討。

　　1  資料與方法

　　1.1  臨床資料
   
　　選取我院2003～2005 年間因乳腺癌行根治術或改良根治術的病理標本60例,均為女性,年齡30～73 歲,平均年齡51 歲。病理類型:浸潤性導管癌48例,非浸潤性導管癌12例。TNM 臨床分期為0～I期9例, Ⅱ期20例, Ⅲ～IV期31例；對照組選癌旁經病理確診為正常乳腺組織的標本26例,均為女性,年齡18～42 歲,平均年齡30 歲。

　　1.2　方法職稱發表論文 
   
　　YAP檢測采用SP免疫組織化學方法。YAP兔抗人多克隆抗體購自北京中杉金橋生物公司，免疫組化SP試劑盒均購于北京中杉金橋生物公司。切片常規脫蠟和水化后, PBS漂洗3次,每次3min;于濕盒內用3%過氧化氫溶液(A液)室溫孵育10min,滴加5%～10%封閉用正常動物非免疫血清工作液(B液)。滴加一抗工作液,YAP于37 ℃孵育箱內孵育12h, PBS漂洗3次,每次3min。滴加生物素標記二抗工作液(C液) ;滴加辣根過氧化物酶標記的鏈酶卵白素工作液,配制新鮮的DAB顯色劑。蘇木素復染細胞核,染色時間2min。

　　1.3  結果判斷
   
　　YAP的結果分析按照說明書的標準進行:采用半定量的方法，光鏡下分析，在排除非特異性染色的前提下，以黃色、棕黃色、棕褐色為陽性，計分方法:（1）按切片中細胞顯色深淺評分，0分為無著色； 1分:細胞染色呈淺黃色；2分:細胞染色呈棕黃褐色。（2）按切片中陽性細胞比例評分，每例隨機觀察5個視野，每個視野100個細胞，計數500個細胞中染色陽性細胞數:1分:陽性細胞數目≤10%；2分:顯色細胞占11%～50%；3分:顯色細胞占51%～75%；4分:75%以上的細胞著色。每例細胞染色積分=（1）×（2），按照積分分值可以分為:陰性表達或無表達（-），0～3分;陽性表達（+），4～8分。

1.4  統計學處理
      
　　所得數據采用SPSS13.0軟件進行統計學處理，計數資料以百分率表示，采用χ2檢驗對各組YAP、P73陽性表達率之間的差異進行統計比較，計算χ2值和P值，相關性分析采用Spearman等級相關性分析，檢驗水準為α=0.05。

　　2  結果
    核心期刊發表論文
　　YAP陽性染色主要定位于細胞核，顯示為棕黃色或棕色顆粒沉著（見圖1a～d），60例乳腺癌組織中有20例為陽性，占33.33%，而在26例正常乳腺組織中有25例為陽性，占96.15%。兩組比較，差異有統計學意義 (χ2=28.7，P<0.0001)。

　　乳腺癌中YAP的陽性表達與年齡組織學分級、TNM分級淋巴結轉移等無明顯關系（P＞0.05）。見表1。表1  乳腺癌組織中YAP的表達與臨床病理學指標、ER及PR之間的關系（略）

　　3  討論
   
　　本文應用免疫組化法檢測YAP蛋白在乳腺癌組織的表達, 并分析其與乳腺癌臨床病理特征、ER和PR的關系, 為揭示乳腺癌生物學特征提供科學依據。
   
　　YAP是一種多功能的細胞內連接蛋白和轉錄共激活因子。于1994年首次發現其綁定于非受體酪氨酸蛋白激酶Src家族成員c�瞃es的SH3基序，將其命名為Yes相關蛋白［1］。YAP在正常機體內參與基因轉錄調節和細胞信號轉導。近年研究發現，YAP在一些腫瘤組織細胞中表達增高、活性增強，推測其可能作為致癌因子參與腫瘤的發生和發展。 Udan等［2］研究發現YAP與腫瘤的形成和控制組織器官的大小關系密切,可能成為區別腫瘤良惡性、惡性程度及預測轉移、預后的指標。Xu等［3］研究發現YAP在肝癌中呈現高表達，并且與血清中AFP的表達和腫瘤的分化相關，是肝癌患者的總生存率和無