開胃進食湯對實驗性胃潰瘍大鼠黏膜愈合和EGF表達的影響

【摘要】  　　目的：通過開胃進食湯對胃黏膜組織的EGF表達的影響,探討開胃進食湯對實驗性胃潰瘍大鼠胃黏膜的保護作用及其作用機制。方法：采用冰醋酸注射至大鼠漿膜下形成胃潰瘍模型,隨機分成生理鹽水(B) 組,雷尼替丁(C)， 組開胃進食湯(D) 組，設立正常對照(A) 組，用游標卡尺測量潰瘍指數(UI),用免疫組化法檢測胃黏膜組織EGF的表達。結果：C、D組與B組比較、D組與C組比較,UI、EGF表達均有顯著性差異( P< 0. 05 或0. 01) ;且 C、D組潰瘍邊緣組織EGF陽性細胞表達較A、B 組逐漸增多(P< 0. 01)。結論：開胃進食湯具有促進EGF分泌、保護胃黏膜上皮細胞,加速上皮細胞增殖、分化、遷移,組織修復而加速潰瘍愈合、提高潰瘍愈合質量,改善潰瘍預后。

【關鍵詞】  開胃進食湯;表皮生長因子;胃潰瘍論文發表程序

　　［ABSTRACT］ Objective: To explore the influences of appetite promotion decoction on the mucosal healing and EGF expression in gastric ulcer model of mice, and its mechanism. Methods: Gastric ulcer model of mice were induced by subserosal injection of glacial acetic acid and then randomly divided into normal saline group (B), ranitidine group (C), appetite promotion decoction group (D), and normal control group (A). Ulcer index was measured with vernier caliper, and EGF expression in the mucosa tissue was eva luated by immune�瞙istochemical method.Results: Significantly different size of UI and level of EGF repression were presented when group C and D were compared with group B, group D was compared with group C (P <0. 05 or 0.01). Besides, EGF expression level in the adjacent tissues of gastric ulcer lesion of group C and D gradually increased comparing with that of group A and B, showing significant differences (P<0.01).   Conclusions: Appetite promotion decoction can promote EGF secretion, protect epithelial cells of gastric mucous, and facilitate the recovery of gastric ulcer by accelerating the proliferation, differentiation, migration, and tissue repair.
   
　�。跭EY WORDS］  Appetite promotion decoction; Epidermal growth factor; Gastric ulcer

　　開胃進食湯源于《醫宗金鑒》雜病心法要訣門類篇中,其方由黨參、白術、茯苓、陳皮、半夏、炙甘草、丁香、木香、藿香、蓮子肉、厚樸、砂仁、神曲、麥芽組成。臨床研究證實其可以促進潰瘍愈合,防止潰瘍復發,但其機制仍不清楚。EGF 是一種具有抑制胃酸分泌,促進上皮增殖, 營養胃腸黏膜的內源性物質,在保護胃黏膜免受損傷因子破壞、維持胃腸黏膜完整性方面起著非常重要的作用,并通過刺激細胞的遷移和增殖以加速胃十二指腸潰瘍愈合過程。本研究旨在探討該藥對實驗性大鼠胃黏膜的愈合作用及其可能的機制。

　　1  材料與方法

　　1. 1  對象、試劑和儀器　
   
　　（1）選健康SD大鼠80只,雌雄各半,清潔級動物,體重180～220g,由西安交通大學醫學院動物中心提供。室溫下喂養,自由飲食飲水。（2）EGF免疫組化多克隆抗體和SABC 免疫織化學試劑盒均購自購自北京中杉金橋生物公司。圖像分析采用MPIAS 多媒體彩色病理圖紋分析系統。（3）藥品：開胃進食湯（法半夏15g， 陳皮15g，茯苓10g，白術12g，黨參15g，砂仁12g，木香12g，麥芽30g，炙甘草10g，六神曲10g，丁香10g，木香10g，藿香10g）由海南醫學院附屬醫院提供, 雷尼替丁由江西匯仁藥業有限公司生產(國藥準字H36021340) 。

　　1.2  動物模型制備、分組及給藥方法
   
　　參照Takagi 法建立動物模型,80只SD大鼠隨機分出20只為正常對照組(A組) ,另60只大鼠禁食24h 后,按3mg·kg- 1體重氯胺酮腹腔注射麻醉,剖腹暴露胃,用微型注射針頭在胃前壁竇體交界處漿膜下注射100%冰醋酸0.03mL ,持續30s ,將胃送還腹腔,縫合皮膚。模型建立后5d隨機分成3組,每組20只:生理鹽水組(B 組) ,雷尼替丁組(C 組) ,開胃進食湯組(D 組) 。用藥劑量按人與大鼠體表面積折算（大鼠日服藥量=人日服藥量×0.018）。中藥以蒸餾水煎煮30min，提取2次，再合并煎液，并將所得藥液用雙層紗布過濾，水浴加熱蒸發濃縮到200%，使每毫升藥汗中含生藥2g，置于100mL玻璃瓶內密封，貯于冰箱中備用；雷尼替丁膠囊由雷尼替丁膠囊與蒸餾水配成相應濃度的懸濁液備用。實驗結束時A、D組各有1只死于灌胃;B組有1只死于胃穿孔;C組有1只死于腹腔感染。發表論文網站 
 
　　1.3  胃組織標本制備　
   
　　喂養15d 后,禁食24h 處死,剪開大鼠腹腔,取出胃,展開胃組織,沿潰瘍周圍切下約0.5cm×0.5cm大小的胃壁組織放入4%多聚甲醛中,固定6h 后石蠟包埋切片。

1.4  觀察指標及檢測方法
   
　　潰瘍指數(ulcer index , UI) 測定,采用游標卡尺(精確度0.02mm) 測量潰瘍面的最大長徑和垂直于最大長徑的最大寬徑,以二者的乘積作為潰瘍指數。EGF測定采用免疫組織化學方法,嚴格按試劑盒說明步驟操作。每組每張切片隨機選取5個視野作圖像分析,即采用面積百分比、積分光密度、平均灰度來檢測EGF的表達。細胞膜或細胞漿出現棕黃色顆粒為EGF陽性細胞。積分光密度越高,平均灰度越低,均說明陽性細胞數量越多。

　　1.5  統計學處理
   
　　試驗數據用均數±標準差（±s）表示,各組數據之間的比較采用SPSS 11.5 分析軟件,進行方差分析,檢驗水準 α=0.05。

　　2  結果

　　2.1  潰瘍指數及EGF變化
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