熒光顯微技術在黎族藥物大青鑒定中的應用

【摘要】  　　目的：探討利用熒光顯微技術對黎族藥物大青進行顯微鑒別的可行性，并為建立大青藥物質量標準提供科學依據。方法：利用研究級正置熒光顯微鏡對未經試劑處理的大青莖粉末和新鮮葉片進行觀察，并拍照。結果：大青莖粉末中主要含有3種類型的纖維，還含有木栓細胞、網狀導管、方晶、腺毛和非腺毛、鐘乳體，且圖像清晰。更特別的是在表皮細胞中還含有銅錢狀的物質及一圈熒光存在于皮層中。在葉片下表皮中氣孔數較多，角質層細胞波紋狀、還有鐘乳體、2細胞的腺毛、非腺毛等結構。結論：利用熒光顯微鏡鑒別生藥粉末，操作簡便，圖像直觀，值得開發利用。在葉片鑒別方面角質層、腺毛等結構清晰可辯，可代替掃描電子顯微鏡，但是還需結合普通光學顯微鏡來確定氣孔的類型。

【關鍵詞】  熒光顯微鏡；大青；黎族藥物；顯微鑒定

　　［ABSTRACT］ Objective: To explore the feasibility of fluorescence microscopic technique in the identification of Clerodendrum cyrtophyllum used in Li medicine and to collect scientific evidence for the development of its quality standards. Methods： The stem powder without reagent and fresh leaves of Clerodendrum cyrtophyllum were observed and photographed under fluorescent microscopy. Results：Under fluorescent microscopy, it was clearly shown that stem powder of Clerodendrum cyrtophyllum was mainly consisted of 3 types of fiber, cork cells, mesh tube, square crystal, glandular, non glandular and cystolith. More specifically, there were coin�瞝ike substances in the epidermis, a fluorescent ring in the cortex. Many stomata in the lower epidermis with ripple�瞝ike cuticle cells, cystolith, 2 cells glandular hairs, non�瞘landular hairs were shown in the fresh leaves images.  Conclusions：It is feasible to use fluorescence microscopic technique in the identification of stem powder of Clerodendrum cyrtophyllum and the cuticle cells and glandular hairs in fresh leaves, but light microscope is also needed for the identification of stomata types. 
   
　　［KEY WORDS］ Fluorescence microscopy; Clerodendrum cyrtophyllum; Li medicine; Microscopic identification

　　黎族藥物大青來源于馬鞭草科植物大青Clerodendrum cyrtophyllum Turcz., 其根、莖、葉入藥，夏秋季采收，洗凈，鮮用。長期以來在華南地區常代替板藍根使用［1-3］。其黎藥名為雅楓能，莖葉入藥，具有清熱解毒的功效［4］。前人已對其根、莖的橫切片顯微結構進行了研究，但是對莖粉末結構的研究未見報道，在葉結構方面,也未見有研究報道［5］。另外，以往研究均利用普通光學顯微鏡，均需用試劑處理，才能觀察，并需一定的繪圖機能。在熒光技術方面，以往的熒光分析技術需將有效成分用試劑提取后才能在熒光分光光度計下測量其熒光光譜［6,7］，操作較麻煩。在葉片研究方面有報道認為利用熒光顯微鏡可觀察氣孔形狀，但不知對葉片其他結構形態是否有效［8］，因此，在本研究中通過嘗試對未經試劑處理的生藥粉末和新鮮葉片在熒光顯微鏡下，進行觀察，以探討利用熒光顯微技術進行生藥顯微鑒定的可行性,為開拓一種簡便有效的顯微鑒定方法，同時為黎族藥物大青質量標準的建立及開發黎藥提供科學依據。

　　1  材料與方法

　　1.1   材料與儀器教育核心期刊論文發表 
   
　　馬鞭草科植物大青Clerodendrum cyrtophyllum Turcz., 從海南醫學院黎族藥用植物觀賞園采集，將其莖去掉葉片后曬干粉碎，取其粉末作為試驗材料。另外在實驗前夕取成熟大青葉片一塊，沖洗干凈晾干備用。所用儀器為研究級正置熒光顯微鏡（Olympus BX51）。

　　1.2  方法
   
　　在研究級正置熒光顯微鏡（Olympus BX51）的自然光下找到大青莖粉末觀察目標，再關上光柵，在熒光下觀察，并拍照。從備用大青葉片中間剪取2mm×2mm的葉塊，背面朝上置于載玻片蓋上蓋玻片后,同樣先在自然光下找到觀察目標，再關上光柵，在熒光下觀察，并拍照。

　　2  結果

　　2.1  大青莖粉末觀察結果
   
　　粉末淡黃色，含有的纖維主要有3種，即X形，L形和分叉狀等纖維（圖1A～C），木栓細胞表面觀四邊形，排列較整齊（圖1D），晶鞘纖維含量豐富，里面同樣含有很多數量的方晶（圖1E）。導管多破碎，多為網紋導管（圖1F～G），在粉末中含有鐘乳體、石細胞（圖1H～I）,在木部薄壁細胞可看到一圈綠色的熒光，很快消失。在粉末中含有一定數量的非腺毛和腺毛（圖1J～K），值得注意的是在表皮細胞中還有許多銅錢狀的分泌組織（圖1L）。

　　2.2  大青新鮮葉觀察結果
   
　　大青葉下表皮淺綠色，在熒光顯微鏡下其角質層細胞垂周壁波狀或深波狀彎曲（圖1M），在葉表皮中可以看到存在鐘乳體（圖1N），單位面積上氣孔數量較多，同時也存在較多2細胞的腺毛，及少量非腺毛（圖1O）。
   
　　3  討論

　　3.1  大青莖粉末結構與大青莖橫切片結構比較
   
　　據文獻報道［3］, 大青莖（徑約5mm）之橫切面，最外緣表皮細胞，散見非腺毛；皮層韌皮纖維與石細胞，多個連生，排列成環，強木化，形成層，2～3層，細胞小，呈類長方形或扁長方形。木質部，由導管、木部薄壁細胞、髓線所組成，導管單個或2～4個連生，主要為網紋導管；髓線細胞呈類長方形、類方形及扁長方形；木部薄壁細胞，與導管伴生，細胞呈類長方形、類方形及扁長方形。中央為髓部，散見石細胞及草酸鈣方晶。
本組研究中，大青粉末除含有上述非腺毛、石細胞、方晶、導管、纖維外還具有少數腺毛和鐘乳體，