銀屑病患者基質金屬蛋白酶-2與基質金屬蛋白酶-9的檢測價值

【摘要】  目的：探討銀屑病患者血清和皮膚中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)水平的臨床意義�！》椒ǎ簩こＰ豌y屑病患者22例，健康對照組15例。采用ELISA 法檢測兩組血清MMP-2、MMP-9，皮膚MMP-2、MMP-9表達，采用免疫組化ABC法。結果：銀屑病患者血清 、皮膚中MMP-2、TIMP-9表達水平顯著高于健康對照組(P<0.05)�！〗Y論： MMP-2、MMP-9增高可能是銀屑病的發病機制之一。

【關鍵詞】  尋常型銀屑病 基質金屬蛋白酶-2 基質金屬蛋白酶-9

　AbstractObjective:To explore the role of matrix metalloproteinases(MMP) in the mechanism of psoriasis.Methods:MMP-2 and MMP-9 in the sera and skin lesions from 22 patients with psoriasis vulgaris were detected by ELISA and ABC methods,respectively.Other 15 healthy subjects served as controls.Results:Both serum and tissue MMP-2 and MMP-9 were increased in psoriasis patients as compared with those in controls (P<0.05).Conclusion:Elevated MMP-2 and MMP-9 may involve in the pathological progress of psoriasis.

　　Key wordspsoriasis vulgarismatrix metalloproteinase-2matrix metalloproteinase-9

　　銀屑病是臨床上常見、易復發、慢性紅斑鱗屑性皮膚病，確切病因尚不清楚，目前認為與遺傳、感染、內分泌代謝、免疫、社會精神因素等有關。主要病理改變為表皮角質形成細胞過度增殖、分化異常、真皮乳頭毛細血管增生擴張和炎癥細胞浸潤。基 質 金 屬 蛋 白 酶 (matrix metalloproteinases ，MMP)是一組金屬離子依賴的細胞外基質(ECM)降解酶,基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)是基質金屬蛋白酶家族的重要成員，參與ECM的重塑、炎癥反應、免疫應答等多種生理和病理過程。為探討MMP 在銀屑病發病機制中的作用，我們對銀屑病患者皮損區和血清MMP-2、MMP-9的水平進行檢測。

　　1臨床資料機械論文發表

　　尋常型銀屑病患者22例，男9例，女13例，年齡23～59歲，平均45歲;病程10個月～12年，平均11年;進行期16例，退行期6例;皮損范圍25%～60%;均為本院皮膚科門診或住院患者。健康對照組15例，男7例，女8例，年齡21～50歲，平均43歲。皮膚組織取自皮膚外科美容切除術者的正常皮膚。

　　2方法

　　2.1組織MMP-2、MMP-9檢測皮膚標本用4mm環鉆常規取材，石蠟包埋;石蠟5μm厚連續切片，常規處理后，微波爐抗原修復，依次加入稀釋的一抗(兔抗人MMP-2、兔抗人MMP-9工作濃度均為1∶100)、生物素標記二抗、SABC、DAB顯色、蘇木素復染。具體操作步驟嚴格按試劑合說明進行。用已知陽性片作陽性對照，PBS代替一抗作空白對照。兔抗人MMP-2、兔抗人MMP-9和即用型SABC免疫組化染色試劑盒均購自武漢博士德生物工程公司。

　　2.2血清MMP-2、MMP-9檢測抽靜脈組3ml，分離血清，-30℃保留樣本備測。MMP-2、MMP-9酶聯免疫吸附試劑盒購自美國 R&DSYSTEMS公司產品，購自福州邁新生物技術公司。實驗操作嚴格按說明書進行，收集血清，加RDI-34的稀釋液于96孔板中，加樣，孵育2h，緩沖液清洗，加MMP-2或MMP-9結合物，加底物，加終止液;檢測結果用酶標儀測定。

　　2.3統計學方法計數資料采用Ridit分析，計量資料采用t檢驗。

　　3結果

　　3.1判斷標準皮膚標本以胞質內出現黃色顆粒狀物質為陽性，按著色強弱分級計分：無著色為0，淺黃色為1，深黃色為2，棕黃色為3;著色范圍以在×40倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數100個細胞，計數陽性細胞所占的百分比均值：<25%為1，25%～50%為2，>50%為3。上述兩項相加即為MMP-2或TIMP-2表達強度積分：<2分為陰性，～3分為弱陽性(+)，～4分為陽性(++)，>4分為強陽性(+++)。

3.2兩組皮膚MMP-2、MMP-9表達

　　銀屑病組皮損皮膚MMP-2、MMP-9呈強表達狀態，主要位于基底層細胞胞漿;同時進行期表達強度高于退行期(P<0.05)。對照組皮膚中MMP-2、 MMP-9表達為陰性或弱陽性，見表1。表1兩組皮膚MMP-2、MMP-9表達強度比較

　　3.3兩組血清MMP-2、MMP-9水平比較

　　銀屑病組血清 MMP-2、MMP-9水平顯著高于對照組(P<0.01)。銀屑病進行期與退行期血清MMP-2、MMP-9水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。表2兩組MMP-2、MMP-9水平比較

　　4討論高級會計師論文發表

　　ECM為皮膚角質形成細胞(keratinoyte,KC)的微環境，影響著KC的生長、分化。ECM的降解主要依靠蛋白水解酶類，MMPs是四類蛋白水解酶(絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天門冬氨酸蛋白酶、基質金屬蛋白酶)中較為重要一類。MMPs是一類結構中含有Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶類，能降解膠原、彈性蛋白、氨基葡聚糖等多種細胞外基質，成為許多領域的研究熱點。Fleisehmajer[1]用免疫組化法檢測發現，正常人皮膚中MMP-2表達為陰性，銀屑病患者皮膚真皮層亦無MMP-2表達，但皮損表皮中MMP-2表達強烈，研究認為，銀屑病表皮中細胞與細胞之間、細胞與基質間黏附關系的改變與MMP-2異常增多有關。PCR檢測銀屑病患者皮損也證實編碼MMPs基因的存在[2]。

　　本研究顯示，銀屑病患者皮損中MMP-2、MMP-9呈強表達狀態，主要位于基底層，進行期表達強度明顯高于退行期(P<0.05)。健康對照組皮膚中MMP-2、 MMP-9表達為陰性或弱陽性，與楊志波等[3，4]報道一致�；颊哐�清 MMP-2、MMP-9水平顯著高于健康對照組(P<0.01)，但進行期與退行期患者血清MMP-2、MMP-9水平比較無統計學意義(P>0.05)。筆者認為，銀屑病患者皮損中MMP強表達，勢必導致皮膚ECM的降解，從而改變KC的微環境，使其正常的生長、分化受到干擾，導致表皮動力學的改變，誘發銀屑病皮損的形成。銀屑病患者血清中MMP-2、MMP-9升高的原因尚未完全清楚，推測皮損中MMP-2、MMP-9是其來源之一。臨床上以MMP作為靶點治療銀屑病已取得一定的療效[5]。同時有研究發現，MMP在角質形成細胞異常凋亡[6]和銀屑病患者皮損微血管異常增生中起重要的作用[7]。因此，以MMP為切入點進行研究，可能為銀屑病發病機制和治療提供新的途徑和方法。

【參