冬蟲夏草保健酒對小鼠巨噬細胞吞噬功能和遲發型變態反應影響的研究

【摘要】  目的：研究冬蟲夏草保健酒對小鼠免疫功能的影響。方法：測定小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能和遲發型變態反應所致的耳部重量的改變。結果：冬蟲夏草保健酒能增強巨噬細胞吞噬功能，致敏后小鼠的左右耳重量差異顯著高于對照組。結論：冬蟲夏草保健酒能增強小鼠特異性細胞免疫功能和非特異性細胞免疫功能。

【關鍵詞】  冬蟲夏草保健酒；小鼠；巨噬細胞吞噬功能；遲發型變態反應
    
　　Abstract  Objective:To study the Effect of Cordyceps sinensis conservancy wine on the immune function of mice. Methods:  Ponderal difference was examined in the  left and right ear of the mice caused by the phagocytosis of peritoneal macrophage and delayed allergy. Results: Cordyceps sinensis conservancy wine could improve the phagocytosis of macrophage ,and the ponderal diference between mice,s left and right ear is greater than that in the control group.Conclusion: Cordyceps sinensis conservancy wine can enhance specific cellular immunity and the non-specific immunity.
    
　　Key words  Cordyceps sinensis conservancy wine; Mice; Phagocytosis of peritoneal macrophage; Delayed allergy

　　冬蟲夏草保健酒以冬蟲夏草為主要原料，以紅棗、枸杞等為輔料釀制而成，含有蛋白質、氨基酸、多糖、核苷酸、無機元素、超氧化物歧化酶（SOD）等多種成分。近年來雖然關于冬蟲夏草對機體免疫功能影響的研究很多，但關于冬蟲夏草與紅棗、枸杞的聯合作用并未見報道，本文研究這些成分對小鼠免疫功能的共同影響。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料  （1）冬蟲夏草保健酒:由包頭醫學院營養食品研究所與包頭某酒廠共同研制；（2）實驗動物：昆明種小鼠，雄性，40只，體重18～22g，由內蒙古大學動物中心提供；（3）姬-瑞氏混合液：按參考文獻[1]的方法配制；（4）雞紅細胞混懸液：采雞全血，用生理鹽水配制成5%（V/V）的混懸液；（5）二硝基氟苯（DNFB）：由天津新興隆化工廠提供。稱取DNFB 7g，丙酮100mL，配成7%的DNFB丙酮溶液；再稱取DNFB 1g，丙酮100mL，配成1%的DNFB丙酮溶液。

　　1.2  方法經濟管理論文發表

　　1.2.1  實驗動物分組和飼喂  將小鼠按體重隨機分為4組，每組10只，即低劑量組、中劑量組、高劑量組和對照組。低、中、高3個劑量組分別是成人推薦量（每人每天60mL）的5倍（5μL/g）、10倍（10μL/g）和20倍（20μL/g）。各組小鼠均喂飼相同的基礎飼料（由內蒙古大學動物中心提供），實驗前將保健酒經真空濃縮20倍，則低、中、高三個劑量組分別變為5倍（0.25μL/g）、10倍（0.5μL/g）和20倍（1μL/g），再用蒸餾水將濃縮20倍的酒分別稀釋40倍、20倍、10倍，即為低、中、高3個劑量組，3個劑量組動物每日分別經口灌胃給予稀釋后的濃縮冬蟲夏草保健酒10μL/g，陰性對照組動物每日經口灌胃給予蒸餾水10μL/g。

　　1.2.2  小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的測定  實驗動物飼養30天后，每只小鼠腹腔注射5%雞紅細胞混懸液0.5mL，18小時后處死動物，仰位固定，腹壁消毒后剪開皮膚，注射2.5mL Hank，s液沖洗腹腔。由腹膜中央剪一小孔，用吸管吸取腹腔沖洗液，滴于載玻片上，37℃溫孵30分鐘，用生理鹽水沖去未貼壁的細胞，涼干后用甲醇固定5分鐘，再用姬-瑞混合液染色10～15分鐘，用蒸餾水沖去染色液，干燥后在油鏡下計數200個巨噬細胞吞噬雞紅細胞數，并計算吞噬百分率和吞噬指數。即：

　　吞噬百分率=（吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/200個巨噬細胞數）×100%

　　吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/200個巨噬細胞數

　　1.2.3  DNFB所致小鼠遲發型變態反應  實驗動物飼養30天后，于第1、第5天每只小鼠后肢皮內注射7%DNFB丙酮溶液0.02mL進行致敏，于第1次致敏的第8天，用1%DNFB丙酮溶液0.02mL涂布于右耳進行攻擊，左耳涂布生理鹽水作為對照。次日處死動物，用直徑8mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重并計算左右耳重量的差值進行單因素方差分析。

　　2  結果

　　2.1  冬蟲夏草保健酒對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響  巨噬細胞的吞噬功能是反映機體非特異性免疫功能的常用指標之一，它反映機體非特異性吞噬多種抗原和抗感染的能力。結果表明，冬蟲夏草保健酒各劑量組吞噬百分率和吞噬指數與對照組相比，差異有統計學意義，且有隨飲用冬蟲夏草保健酒劑量的增加而增高的趨勢，見表1。

　　表1  小鼠腹腔吞噬細胞雞紅細胞實驗的吞噬百分率和吞噬指數比較（略）

　　*與對照組比較P＜0.05,**與對照組比較P＜0.01

　　2.2  冬蟲夏草保健酒對小鼠遲發型變態反應的影響  該項實驗是對特異性細胞免疫功能的測定。結果表明，冬蟲夏草保健酒各劑量組小鼠右耳經1%DNFB丙酮溶液攻擊后明顯腫脹，重量高于左耳，其中、高劑量組左右耳重量的差值明顯高于對照組,且差異有統計學意義（見表2）。

　　表2  二硝基氟苯誘導小鼠DTH耳重量比較（略）護理論文發表網論文發表雜志

　　*與對照組比較,進行單因素方差分析P＜0.05,**與對照組比較P＜0.01

　3  討論
   
　　本研究通過用3個劑量冬蟲夏草保健酒對小鼠免疫作用的影響進行了初步實驗。結果表明，冬蟲夏草保健酒能促進小鼠巨噬細胞吞噬功能、使致敏后小鼠的左右耳重量差顯著高于對照組。
    
　　冬蟲夏草保健酒調節免疫功能的作用與冬蟲夏草保健酒中成分有關。冬蟲夏草含蛋白質為20.06%～26.40%,含天門冬、蘇、絲、谷、脯、甘、纈、蛋、異亮、亮、酪、苯丙、賴、組、精、胱、半胱、色氨酸等18種氨基酸［2］。蟲草在臨床上的補益、輔助治療消化系統及神經系統疾病、抑制病菌及增強免疫功能等作用,似乎與其富含上述氨基酸有必然的聯系［3］。蟲草所含的多糖均為半乳甘露聚糖，大量藥理實驗表明，蟲草多糖類物質具有多種作用，如抗腫瘤、增強單核巨噬細胞的吞噬能力、提高小鼠血清中IgG的含量、對體外淋巴細胞轉化有促進作用和抗輻射作用等［4］。目前已從冬蟲夏草