力竭運動后不同時相大鼠心肌肌鈣蛋白-T的變化

【摘要】  目的：探討力竭運動后大鼠心肌肌鈣蛋白-T（cTnT）分布及含量的變化。方法：將50只健康成年雄性SD大鼠隨機分為一次力竭運動組和安靜對照組，運動組采用游泳運動方式分別于力竭運動后即刻、6 h、12 h、24 h取材，應用免疫熒光技術和圖像分析方法對大鼠心肌肌鈣蛋白-T分布及含量的改變進行研究。結果：力竭運動后各時相大鼠心肌cTnT分布變得紊亂，在心肌細胞間及細胞內的分布不均一；一次力竭后即刻、6 h和12 h右心室cTnT含量高于對照組（P＜0.01）。結論：一次力竭運動均可使心肌cTnT分布變得紊亂，這可能是導致心肌機械功能異常的原因之一。

【關鍵詞】  力竭運動；心肌微損傷；肌鈣蛋白T教師論文發表

    Abstract  Objective: To observe the changes in the distribution and the content of troponin T(cTnT) in myocardial tissue of cats after exhaustion exercise at different time points. Methods: Fifty Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into sedentary control group and single bout of exhaustion exercise groups. Rats in the exhaustion exercise group were killed for the specimen of cTnT 0 h,6 h,12 h and 24 h after exhaustion exercise. Immunofluorescence technique and image-analysis were used to study the changes in distribution and content of cardiac troponin T(cTnT) in myocardial tissue of the rats. Results: After single bout of exhaustion exercise, myocardial cTnT distribution became disuniform, in which myocardial cTnT became increased, decreased or even vanished in different sections. Right ventricle myocardial cTnT content 0 h,6 h and 12 h after single bout of exhaustion exercise was remarkable higher than that in the control group (P<0.01). Conclusion: Single bout of exhaustion exercise may cause disorder and disuniformity in the distribution of myocardial cTnT,  which may be one of the reasons for myocardial mechanical malfunction.

    Key words  Exhausive exercise； Heart micro-injury； Cardiac troponin T

    研究發現，反復持續進行的大強度運動和急性力竭運動可對機體產生不利影響，常導致運動性疲勞與損傷的發生，尤其是運動性心肌微損傷[1-3]，可直接影響執行心肌特殊功能的蛋白質的表達異常，造成心肌功能的異常。心肌肌鈣蛋白（cTn）是存在于心肌肌原纖維中細肌絲上的收縮調節蛋白，主要調節心肌收縮過程中粗、細肌絲之間的相對滑行。cTn分子呈球形，含3個亞單位，即cTnC、cTnI和cTnT。cTnT的作用是將整個肌鈣蛋白分子結合于原肌凝蛋白。當心肌細胞受損時，cTn可從細胞中釋放至血液循環中，現有方法可從外周血清中檢測cTnT和cTnI。目前臨床上把cTnT認為是確定心肌發生心肌缺血、缺氧最早的標志物。有學者采用大鼠的心肌缺血模型，利用免疫組化的方法測量缺血后不同時間段的cTnT改變情況，發現大鼠急性心肌缺血15 min cTnT即出現明顯缺失，隨著缺血時間的延長，cTnT的缺失面積逐步增大[4]，籍此認為cTnT對于早期心肌缺血損傷的病理學診斷是一個敏感的指標，同時也說明缺血、缺氧可以造成心肌cTnT的降解。肌鈣蛋白作為介導肌絲滑動的結構物質對心肌正常機械功能的發揮有重要作用，肌鈣蛋白的降解可能是造成心肌機械功能障礙的原因之一。關于力竭運動后cTnT改變的實驗研究尚未見報道，本研究選擇cTnT作為目標因子，旨在研究不同力竭運動后心肌cTnT的改變，為運動性心肌微損傷時心肌纖維病理改變和心肌機械功能異常發生機制的探討提供實驗依據。

    本研究制定了力竭游泳運動實驗動物模型，觀教育教學論文發表 察實驗大鼠在力竭運動后即刻、6 h、12 h和24 h 4個時相點cTnT分布及含量的變化，試圖為力竭運動后心肌機械功能異常的發生機制探討提供實驗依據。

　　1  材料與方法

　　1.1  實驗動物和分組

　　健康雄性成年SD大鼠50只，體重（260±8 ） g。大鼠隨機分為5組，每組10只，其中一次力竭游泳運動4個組，對照1個組，各組間大鼠初始體重差異無顯著性（P＞0.05）。國家標準嚙齒動物飼料喂養，自由飲食。飼養環境為室溫（20±2) ℃，光照時間12 h，相對濕度40 %～55 %。

　　1.2  實驗方法
 
　　1.2.1  力竭游泳運動

　　采用PVC特制泳池，規格為1.6 m×0.8 m×1.2 m，內壁光滑，水深約60 cm，超過大鼠身長2倍，控制水溫在30～33 ℃。運動組大鼠進入動物房后首先適應3 d，然后進行2 d適應性游泳運動（20 min/次），每次運動后，迅速用干毛巾擦干大鼠體表水分，電吹風吹干后，放回籠中休息，第3 d尾部負重3 %體重的重物進行一次力竭運動，力竭標準參照Thomas的報道[5]。對照組籠中飼養，無運動干預。

　　1.2.2  大鼠心肌取材 文學論文發表

　　一次力竭運動組分別于運動后即刻、6 h、12 h、24 h取材，對照組正常飼養相應天數后與運動組同時取材。大鼠腹腔注射10 %水合氯醛（1 mL/100 g體重）麻醉后，開胸并迅速取出心臟，經滅菌生理鹽水清洗后迅速垂直于心臟長軸切取心肌組織，滴加OCT包埋劑后置于液氮冷凍20 s后轉入冰凍切片機恒溫箱，切取7 μｍ厚的冰凍切片，置于-70 ℃超低溫冰箱備用。

　　1.2.3  心肌冰凍切片的免疫熒光染色

　　cTnT在胞漿內表達，采用綠色熒光標記，具體步驟如下：（1）將-70 ℃超低溫冰箱保存的冰凍切片取出，室溫復溫30 min后入4 ℃丙酮固定10 min，PBS漂洗5 min×3次；（2）10 %正常山羊血清封閉，室溫孵育10 min；（3）棄去血清，勿洗，滴加1∶100稀釋的小鼠抗大鼠cTnT（美國Lab Vision公司），4 ℃過夜，PBS漂洗5 min×3次；（4）滴加1∶100稀釋的