紅烏天麻和種麻改善東莨菪堿誘發大鼠記憶障礙的比較

【摘要】  目的 比較紅烏天麻與種麻對東莨菪堿誘發大鼠記憶障礙的改善作用。方法 用紅烏天麻與種麻灌胃飼養幼鼠一個月，采用一次性腹腔注射東莨菪堿誘導大鼠記憶獲得性障礙模型，Morris水迷宮實驗測試大鼠尋找平臺的潛伏期，并測定海馬組織乙酰膽堿酯酶活性及海馬蛋白含量。結果 紅烏天麻與種麻對東莨菪堿誘發大鼠的記憶障礙均有顯著改善作用，并能抑制海馬組織乙酰膽堿酯酶活性及提高蛋白含量，3 g/kg種麻劑量組的改善作用達到商品麻的水平。結論 紅烏天麻和種麻對東莨菪堿誘導的大鼠記憶形成障礙有明顯的改善作用，其藥效達到商品麻和陽性對照水平，可以替代商品麻投料入藥。

【關鍵詞】  商品麻;種麻;東莨菪堿;Morris水迷宮;學習記憶

　天麻具有平肝熄風，止痙等功效〔1，2〕。臨床上常用于驚風抽搐、風濕痹、頭痛、眩暈、胸痹、癲癇等疾病。近年來研究發現，天麻還具有增強免疫力、提高記憶力、抗衰老和抗遺忘的作用。天麻屬于蘭科非自養型植物，一直依靠采掘野生資源供藥用，自然資源受到嚴重的破壞。60年代后，天麻的種植和栽培研究迅速發展，特別是種子繁殖成功，使天麻的生產進入了一個新的歷史時期，但天麻的栽培需要消耗大量的木材，天麻種植每平方米需消耗35～40 kg木材〔3〕，天麻的大量生產與森林保護之間的矛盾日益突出。此外，天麻從種子到完全發育需要2～4年的時間〔3〕，其中由種麻發育為蕁麻要1年的時間，再經歷45～65 d才能長成商品麻。探究天麻種麻是否對記憶獲得性障礙有改善作用，并比較天麻種麻和商品麻對記憶獲得性障礙的改善作用，從而在開發益智和預防老年癡呆等相關產品方面，替代商品麻投料入藥，有著極為深遠的現實意義。

　　1 材料與方法教育教學論文發表

　　1.1 材料 Wistar大鼠(體重90 g)60只，雌雄各半，由湖北省實驗動物研究中心提供。天麻種麻、商品麻均為紅烏天麻品種，來源于宜昌市天麻研究所大老嶺栽培場，海拔1 400 m。氫溴酸東莨菪堿注射液購自徐州萊恩藥業有限公司，批號32022136。石杉堿甲購自豫中制藥廠，批號10940156。其余試劑均為分析純。乙酰膽堿酯酶測定和雙縮脲蛋白測定盒購于南京建成生物工程研究所。Morris水迷宮購自成都泰盟科技有限公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 樣品的制備 商品麻的制備：取紅烏天研究生論文發表 麻425 g干品，水煎三次，每次40～60 min。將濾液放入旋轉蒸發儀中濃縮三次得到濃度為6 g/kg商品麻。天麻種麻中、高劑量制備，由三峽大學生物資源及開發研究中心提供種麻干粉,溶于水中，定容后稀釋成3、6 g/kg的種麻溶液。

　　1.2.2 分組及給藥方案 Wistar大鼠(體重90 g)，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，分別為生理鹽水對照組、模型組(灌胃生理鹽水)、種麻中(3 g/kg)、高劑量組(6 g/kg)、紅烏天麻組(6 g/kg)和石杉堿甲陽性對照組(2 mg/kg)〔4，5〕。以上各組濃度折合成人的劑量而得。種麻，商品麻及石杉堿甲均搖勻后按體重劑量1 ml/kg灌胃，每日1次，連續給藥30 d。東莨菪堿致記憶障礙大鼠模型建立〔6，7〕：末次給藥后1 h，模型組，種麻中、高劑量組，商品麻組及陽性對照組，均腹腔注射東莨菪堿(2 mg/kg)，生理鹽水對照組注射等量的生理鹽水。注射30 min后，在相同的條件下進行Morris水迷宮測試。

　　1.2.3 Morris水迷宮行為測定 定位航行試驗：用于評價大鼠對水迷宮學習和記憶的能力，試驗歷時6 d。第一天讓大鼠自由游2 min，從第二天起，每天分上、下午兩次測量，每次每只大鼠訓練4次，訓練開始是從距離平臺最遠的入水點開始，將大鼠沿池壁放入水中，觀察并記錄其尋找至爬上平臺路線圖，所需時間(潛伏期)。4次訓練按順時針方向分別從4個不同入水點入水，如大鼠在120 s內未找到平臺，則引領其至平臺，這時潛伏期為120 s，每次訓練間隔60 s，實驗以潛伏期為測量指標。

　　1.2.4 大鼠海馬乙酰膽堿酯酶活性及海馬蛋白含量的測定 行為實驗結束后，立即斷頭處死大鼠，在冰塊上快速分離海馬，制成10%組織勻漿，低溫離心取上清液，按試劑盒說明書方法操作。

　　1.3 統計學處理 組間差異顯著性用t檢驗。省級論文發表

2 結 果

　　2.1 各組大鼠對Morris水迷宮學習記憶的影響 各組大鼠在5 d的訓練中，潛伏期處于一種下降的趨勢，其中前3 d潛伏期下降較明顯，是學習和記憶形成期。后2 d下降變緩和趨于平穩，是學習和記憶的鞏固期，見圖1。生理鹽水對照組5 d平均潛伏期與模型組比較有顯著差異，說明造模成功; 3 g/kg劑量的種麻組與商品麻組比較，無顯著差異。商品麻組、種麻高、中劑量組的保護作用，均達到陽性對照組水平。6 g/kg劑量的種麻組的保護作用不及商品麻組(P<0.05)，見表1。

　　2.2 灌胃飼養一月對體重的影響 經一個月的飼養，商品麻組，種麻各組的大鼠體重均比生理鹽水對照組和石杉堿甲組高，但無統計學意義，提示商品麻和種麻都有促進大鼠機體的生長發育作用，但需長期服用，效果更佳，見表1。表1 種麻對平均潛伏期和體重的影響(x±s，n=10)

　　2.3 商品麻、種麻對海馬乙酰膽堿酯酶活性、海馬蛋白含量的影響 商品麻和種麻各劑量組均能抑制乙酰膽堿酯酶活性;其中3 g/kg種麻組與6 g/kg商品麻組無顯著差異;6 g/kg種麻組抑制乙酰膽堿酯酶活性不及等劑量商品麻組(P<0.05);與陽性對照組比較，商品麻組、種麻高、中劑量組均無顯著差異，見表2。商品麻和種麻各組別均能提高海馬蛋白含量;其中商品麻組海馬蛋白含量高于種麻高、中劑量組(P<0.05，P<0.01)，見表2。表2 種麻對膽堿酯酶活性、海馬蛋白含量的影響(x±s，n=10)

　　3 討 論

　　生理性記憶可分為記憶的獲得，記憶的鞏固和記憶的再現三個階段。東莨菪堿是中樞M�残湍憠A受體拮抗劑，可阻斷M1和M2受體，降低海馬乙酰膽堿含量，使動物記憶形成過程發生障礙〔8〕。大鼠腹腔注射2 mg/kg東莨菪堿可造成記憶獲得性障礙模型。中樞膽堿能系統的功能是學習的重要生理基礎。衰老的“膽堿能學說”認為人或動物的中樞膽堿能系統的退行性改變是造成老齡性認知、學習記憶能力衰退的主要原因〔8〕。腦內乙酰膽堿含量降低，乙酰膽堿酯酶活性升高，膽堿乙酰轉移酶活性降低，M�埠蚇�材憠A受體數量減少等中樞膽堿能系統的功能下降，即可在人類自然衰老過程造成學習記憶障礙〔9〕。

　　本研究結果提示紅烏天麻的種麻和商品麻對記憶障礙模型大鼠的記憶功能有顯著的改善作用，其作用機制可能與抑制乙酰膽堿酯酶活性有關。并且商品麻和天麻種麻有促進機體生長發育的功能。天麻種麻3 g/kg中劑量組在5 d平均潛伏期(s)以及抑制海馬組織乙酰膽堿酯酶活性方面，達到商品麻水平;而6 g/kg劑量的種麻組與商品麻組比較，尚不及商品麻水平，推測可能與種麻制劑工藝不同有關。所以從經濟發展和保護環境的綠色生產角度以及天麻種麻已能成功的代料工廠化生產，一年能培育4代，且天麻種麻的天麻素含量高于商品麻〔1〕等方面綜合考查，在開發與天麻相關的益智和預防老年癡呆等產品方面，用天麻種麻替代商品麻投料是可行的，它能有效地解決天麻的產業化種植與天麻種植過程中消耗大量木材的弊端，能取得更好的經濟和社會效益。

【參考文獻】
  　　1 葉 紅，沈映