D半乳糖對衰老模型SD大鼠性激素、自由基水平的影響及山茱萸納米微粒水提液的作用

【摘要】  　　目的 探討山茱萸水提液及納米微粒水提液對雄性SD衰老模型大鼠血清中性激素水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影響。方法 以D�舶肴樘沁B續腹腔注射制作亞急性衰老模型，經胃灌服0.57 g·kg-1·d-1的山茱萸水提液和山茱萸納米微粒水提液30 d，采用黃嘌呤氧化法檢測血清中SOD活性、硫代巴比妥酸（TBA）法檢測血清MDA含量、電化學發光法檢測性激素水平。結果 D�舶肴樘撬ダ夏Ｐ痛笫笮奂に厮�平、SOD活性明顯低于正常組（P<0.01)， MDA含量明顯增高（P<0.01)，而山茱萸水提液及山茱萸納米微粒水提液均能有效提高衰老模型大鼠血清SOD活力(P<0.05,P<0.01)、雄激素水平（P<0.01)；降低衰老模型大鼠MDA含量,與模型組比較差異有顯著性(P<0.01)。且納米微粒水提液的藥效優于山茱萸水提液(P<0.05)。結論 山茱萸可通過提高亞急性衰老大鼠血清睪酮含量、提高機體抗氧化能力、抑制脂質過氧化而發揮延緩衰老的作用，且其納米微粒水提液效果優于山茱萸水提液。

【關鍵詞】  山茱萸;衰老;性激素;納米微粒

　　人類的衰老與性腺結構和功能的退化有密切關系，有關補腎中藥延緩衰老的研究屢見報道。目前的研究表明，用性激素預防衰老和治療更年期綜合征是有益的，但是存在著很多不足，如阻塞性黃疸、紅細胞增多、男性將面臨前列腺疾病問題等〔1，2〕。因此研制開發出能延緩衰老、預防老年疾病、提高生活質量和副作用小的新藥具有重要的意義和前景。山茱萸為山茱萸科燈臺樹屬植物山茱萸（Cornus officinalisSieb.et Zucc）的成熟干燥果肉,功能補腎益肝、澀精止汗〔3〕,是傳統補腎延緩衰老藥物。本實驗觀察了山茱萸及其納米制劑對D�舶肴樘侵滤ダ洗笫笾�質過氧化和血清性激素水平的影響，探討其在抗衰老過程中的作用及可能的機制。

　　1  材料與方法

　　1.1  動物 中國論文發表

　　健康5月齡雄性SD大鼠40只，體重350～400 g（佳木斯大學動物實驗中心提供）。

　　1.2  藥品

　　中藥山茱萸購自佳木斯寶泰大藥房，經本校省高校生物制劑重點實驗室鑒定符合藥典標準。D�舶肴樘牵▏�產AR級）；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒購自南京建成生物工程研究所；睪酮(T)、促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)診斷試劑盒為德國羅氏診斷有限公司產品。

　　1.3  模型復制與分組

　　將大鼠按體重隨機分為青年對照組（青年組）；衰老模型組（模型組）；山茱萸水提液組（水提組）；山茱萸納米微粒水提液組（納米組），每組10只。基礎飼養7 d。青年對照組側腹部皮下注射0.9%的生理鹽水，其余各組均側腹部皮下注射5% D�舶肴樘�0.16 ml/100 g（80 mg/kg），1次/d，連續給藥8 w，復制亞急性衰老大鼠模型。

　　1.4  給藥方法

　　成模后水提組按0.57 g·kg-1·d-1灌服山茱萸水提液，納米組按0.57 g·kg-1·d-1灌服山茱萸納米微粒水提液，青年對照組和衰老模型組每日灌服相同劑量的溫開水。連續灌胃30 d，斷頭取血備用。

　　1.5  檢測指標 學術論文發表

　　采用黃嘌呤氧化酶法檢測血清中SOD活性；硫代巴比妥酸(TBA)顯色法檢測血清中MDA含量。電化學發光法檢測血清中T、FSH、LH水平。

　　1.6  統計學處理

　　實驗結果以x±s表示，所有數據均采用SPSS16.0軟件進行分析處理，組間比較采用方差分析。

　　2  結果

　　2.1  各組大鼠血清自由基水平檢測

　　與青年組相比,模型組大鼠血清SOD的活性明顯降低(P<0.01),MDA含量顯著增高（P<0.01），模型組出現與衰老相同的特征〔4〕,說明
造模成功。與模型組相比，山茱萸給藥組SOD活性均顯著升高（P<0.05,P<0.01）、MDA含量則降低（P<0.01）；且納米組能更有效地改善機體抗氧化能力。見表1。表1  各組大鼠血清中SOD活性和MDA含量檢測結果(略)

2.2  各組大鼠血清性激素水平檢測

　　與青年組相比，模型組大鼠血清T含量顯著降低(P<0.01)；與模型組相比，山茱萸給藥組血清T含量均升高（P<0.01），且納米組升高更顯著。各組FSH、LH結果均小于0.1 mIU/ml，無顯著差異。見表2。表2  各組大鼠血清性激素水平檢測結果(略)

　　3  討論
   
　　自衰老的“免疫�采窠洩矁确置凇睂W說提出以來，性激素一直是研究的熱點之一。Hollander等〔5〕發現老年男子的睪丸精索靜脈T水平低于青年男子，是衰老降低T產生的有力證據。臨床觀察也證實機體的衰老與性激素的分泌量的多少和雌雄激素的比值存在內在的聯系，隨著年齡的增長中老年男性血清T降低〔6〕，男性下丘腦�泊贵w�残韵�(睪丸)在維持男性正常的生殖內分泌功能方面起到重要作用。
   
　　本研究表明，模型組與正常組比較，SOD活性明顯降低，MDA含量顯著升高，經山茱萸治療后，SOD活性明顯升高，MDA含量明顯減少，山茱萸納米組效果優于水提組。SOD與MDA對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用,SOD的測定常常與MDA的測定相互配合,而SOD活力高低又間接反映了機體清除氧自由基的能力，MDA的高低間接反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。
   
　　本次實驗發現模型組與正常組比較，血清T水平明顯降低（P<0.01），說明D�舶肴樘钦T導的亞急性衰老模型大鼠出現激素水平擬衰老變化〔7〕。但本實驗中各組測得的FSH、LH結果無差異（均為<0.100 mIU/ml)沒有統計學意義,這與王純庠等〔8〕的研究結果相似。其發生與機體氧化應激導致自由基攻擊加強，從而使細胞受損進而影響T的合成有關〔9〕。
  
　　本研究證實山茱萸可通過改善衰老時機體自由基清除酶活性，增強對自由基的清除，減少對細胞的損害，發揮減輕睪丸細胞損傷而提高T的合成。其作用還可能通過影響下丘腦釋放促性腺激素釋放激素而作用于垂體前葉，影響其FSH和LH的合成、釋放，而FSH和LH分別作用于睪丸的曲細精管生精細胞和間質細胞，后者產生T，發揮生理作用。當FSH和LH產生過多時就會抑制促性腺激素釋放激素的產生與釋放，同樣，當T水平過高時也會抑制LH的產生與釋放，通過這種“負反饋”機制，使機體激素水平保持一種平衡狀態。中藥納米化后,會賦予傳統中藥以新的功能,這些功能可能包括：提高生物利用度、增強靶向性、降低毒副作用、呈現新的功效、拓寬原藥的適應證、豐富中藥的劑型選擇和減少用藥量等〔10〕。正是這種納米化后的改變使山茱萸納米微粒水提液對血清T及抗氧化作用的效果要優于單純的水提液。
   
　　綜上，血清SOD、MDA、T結果可以得出衰老模型大鼠由于過度氧化損傷促成了跟年齡相關的T分泌下降〔9，11〕，也可能通過抑制睪丸間質細胞凋亡提高T水平〔12〕