WWOX蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

【摘要】  　　目的 探討WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)基因在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義。方法 用免疫組化方法檢測50例鱗癌、31例腺癌及20例癌旁正常組織中WWOX基因蛋白的表達，并分析其與各臨床病理指標之間的相關性。結果 WWOX基因在72.8%的非小細胞肺癌中失表達或表達減少，而在相鄰正常肺組織中有80.0%正常表達。WWOX基因的表達與組織類型、細胞分化程度密切相關(P<0.05)，在鱗癌和低分化癌中WWOX基因失表達或表達減少。結論 WWOX蛋白在非小細胞肺癌組織中呈低表達，該蛋白表達的缺失可能在不同類型非小細胞肺癌的形成中發(fā)揮了不同的作用。

【關鍵詞】  非小細胞肺癌 WWOX基因 WWOX蛋白

　　ABSTRACT: Objective  To study the expression of WWOX gene in non-small cell lung cancer and its significance. Methods  WWOX protein expression was eva luated by immunohistochemistry in 81 NSCLC patients (50 squamous cell carcinomas, 31 adenocarcinomas and 20 adjacent normal lung tissues), and correlation with histopathologic (histotype, grade, tumor-node-metastasis, stage) and clinical characteristics was studied. Results  WWOX expression was absent/reduced in 72.8% of NSCLC, whereas it was normal in 80.0% of adjacent normal lung tissues. WWOX expression was strongly associated with tumor histology and histologic grade (P<0.05), the percentage of cases with absent/strongly reduced WWOX expression was higher in squamous cell carcinomas and in poorly differentiated tumors. Conclusion  The loss of WWOX expression plays a different role in tumorigenesis of distinct histotypes of NSCLC.高級職稱論文發(fā)表

　　KEY WORDS: non-small cell lung cancer (NSCLC); WWOX gene; WWOX protein

　　肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率呈明顯上升趨勢，已位居腫瘤第一位［1］。非小細胞肺癌有不同的組織類型、臨床行為和短的生存期。WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)基因是近年來發(fā)現的一個可能的腫瘤抑制基因，位于染色體16q23.3-24.1區(qū)域，跨越了整個常見染色體脆性位點FRA16D。該脆性位點易在香煙等物質作用下發(fā)生基因變異。近年來的研究證明其表達缺失與乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。本研究擬采用免疫組化方法檢測WWOX蛋白在非小細胞肺癌中的表達，探討其在非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用和預后意義。

　　1  材料與方法

　　1.1  臨床資料及標本來源 中國論文發(fā)表

　　收集鄭州大學第一、二附屬醫(yī)院2004-2007年胸外科手術切除并經病理確診的原發(fā)性非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)標本81例，其中男53例，女28例；年齡31-75歲，平均58歲。所有患者術前均未接受化療、放療和其他治療。術后迅速取癌組織及距癌組織邊緣5 cm以上的正常肺組織，常規(guī)石蠟包埋。

　　1.2  免疫組織化學法檢測WWOX蛋白的表達

　　兔抗鼠WWOX(28-42)多克隆抗體，購自Calbioehem公司。操作按SP免疫組織化學試劑盒說明書進行。采用UIP法染色，石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，熱抗原修復，抗WWOX多抗工作濃度1∶200，陽性著色定位于腫瘤細胞和(或)基質細胞胞質內，呈褐色顆粒。按統一判定標準：①陽性細胞面積占切片總面積的百分比進行記分，設0%-5%為0分，5%-25%為1分，25%-50%為2分，50%-75%為3分，75%-100%為4分；②按陽性細胞中染色的強度記分：弱陽性為1分，中等陽性為2分，強陽性為3分。將上述兩項之和相加，大于1的判定為陽性標本。陰性對照以PBS代替一抗。學術論文發(fā)表

　　1.3  統計學分析

　　所有數據用SPSS11.0軟件進行統計處理。采用χ2檢驗、秩和檢驗，以α=0.05為差異有統計學意義的標準。

　　2  結 果

　　2.1  WWOX基因在肺癌組織和相應癌旁正常組織中的表達

　　WWOX蛋白主要在細胞胞質中表達，肺癌組織WWOX蛋白失表達率72.8%(59/81)，明顯高于癌旁正常組織20%(4/20)，二者之間有高度顯著性差異(P<0.01)。

　　2.2  WWOX蛋白表達與臨床病理指標之間的關系

　　在非小細胞肺癌組織中，男性患者WWOX蛋白表達明顯低于女性患者，鱗癌患者明顯低于腺癌患者，低分化癌明顯低于高分化癌，差異均有統計學意義(P<0.05)，但與年齡、臨床分期無關(P>0.05，表1)。表1  WWOX蛋白的表達與NSCLC臨床病理指標之間的關系（略）

　　3  討 論

　　WWOX基因位于人類普通的染色體脆性位點，跨越微衛(wèi)星體標記D16S515-D16S504，包含第二常見的脆性位點FRA16D(16q23.3-q24.1)，由9個外顯子組成。Bdenarek等［2-4］測定FRA16D區(qū)域的序列，克隆出完整的cDNA和候選基因，命名為WWOX。編碼含414個氨基酸的蛋白，其氨基末端的88個氨基酸與WW域蛋白家族的序列同源。

多項研究已經發(fā)現WWOX基因在實體瘤和細胞系中發(fā)生經常性缺失。Bednarek等［3-4］用Northern blotting和RT-PCR的方法檢測到乳腺癌細胞系中有不同水平的WWOX表達，與細胞系的惡性程度呈負相關，高侵襲性的細胞系如MDA-MB-231和MDA-MB-435中WWOX低表達或基本檢測不到，而低侵襲性的細胞系如MCF7和T47D相對高表達。

　　研究表明，WWOX基因的失活通常是由于4-8號外顯子的異常拼接和等位基因的雜合性缺失、純合性缺失和不常見的基因突變。腫瘤中最常見的表達是全長的WWOX mRNA和四個異常的mRNA拼接，野生型WWOX蛋白常常缺失，缺失并非由于DNA甲基化導致的轉錄沉默，而可能是調節(jié)WWOX啟動子的轉錄活性發(fā)生了改變［5］。Paige等［6］研究證實WWOX在卵巢癌細胞系和其他腫瘤細胞系中純合性缺失，失去WWOX基因編碼酶的部分，從而影響腫瘤細胞的生長。

　　本研