水產品中丙酸睪酮殘留檢測方法分析
作者:黃成澤 蔣翠紅時間:2015-12-29 14:35:12 來源:www.vortexsignal.com 閱讀次數:1023次 ]
【內容摘要】：丙酸睪酮是一種比較典型的睪酮類的衍生物，其主要合成方式是人工合成，根據其合成的主要物質以及其主要的特性特點可以看出，丙酸睪酮是一種具有蛋白質活性的同化激素，對于當前的水產養殖業的發展具有重要的作用。因此在這種情況下，對于水產品中丙酸睪酮殘留檢測方法進行研究和分析具有重要的現實意義。
【關鍵詞】: 水產品 丙酸睪酮 殘留檢測 方法分析
1 水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法分析
1.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。
本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。
本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產品。
1.2 實驗方法分析
1. 樣品處理
取待測樣品均勻搗碎處理，于冷凍室存儲。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，加入工作溶液進行混勻，水浴十分鐘之后， 再冷卻至室溫，加入一定量的叔丁基甲醚，振蕩均勻，進行超聲處理，再進行離心處理，取上清液。
2. 凈化處理
取上清液于-80℃條件下靜置約20 分鐘，然后轉移至雞心瓶進行蒸發處理。再在殘留物中添加乙酸乙酯- 正己烷進行溶解，溶解完畢后再向其中分別加入丙酮和正丁烷3ml、6ml， 倒入固相萃取柱中，準備過柱。采用丙酮- 正己烷作為過柱液， 將洗脫液進行水洗兩次后，吹干。
3. 衍生化處理
取相應的衍生化試劑加入凈化處理后的殘渣中，混勻后進行超聲處理，然后烘干，加入正己烷進行定容之后，進行氣相色譜- 質譜分析。緊接著就是對于標準溶液進行衍生化處理。
4. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用甲醇溶液進行稀釋，將標準中間液的濃度分別稀釋成0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0μg/ mL，分別去定量按照衍生化處理的處理方法，進行GC 以及MS 測定。然后以配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應的標準曲線，并根據標準曲線計算出相應的回歸方程和相關的曲線系數。
5. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
1.3 結果與討論
本次實驗測定共經歷了樣品處理、凈化處理、衍生化處理、標準曲線繪制和結果出來分析等幾個主要階段。過程中采用配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應的標準曲線具有一定的科學性。所選擇的回收率、精密度的計算方法也具有很好的說服力和可信度，從實驗的結果來看，水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法基本可以滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，又有很好的可行性。
2 水產品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯質譜測定方法分析
2.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產品。
2.2 實驗方法分析
1. 樣品前處理
將實驗所選擇的樣品中的魚類的肌肉組織進行搗碎后均勻攪拌，在低溫條件下儲藏。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，再加入一定量的標準工作溶液和叔丁基甲醚之后，進行混勻、超聲處理、振蕩處理、離心處理，然后取上層清液分別轉移到梨形瓶之中，蒸發吹干。然后進行復溶、冷凍、再離心，離心處理之后準備進行液相色譜- 串聯質譜測定分析。
2. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用乙腈-0.1% 甲酸水溶液進行稀釋， 將標準中間液的濃度分別稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100ng/ml，另外在每一個標準溶液中還要加入一定量的20 ng/mLNT-D3 作為內標的在一定條件下進行液相色譜- 串聯質譜測定。然后以標準中間液的濃度作為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標， 繪制標準曲線，并根據標準曲線計算出相應的回歸方程和相關的曲線系數。
3. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
4. 丙酸睪酮的飛行時間質譜定性測定
采用1.0 μg/mL 丙酸睪酮標準溶液對LC-MS QTOF 進行碰撞能量、錐孔電壓、等質譜條件和流動相組成及梯度等色譜條件進行研究，并確定丙酸睪酮的飛行時間質譜測定信息。
2.3 結果與討論
本次試驗檢測過程中，在HPLC/MS QTOF 色譜質譜檢測的基礎上進行了優化處理，然后通過丙酸睪酮的飛行時間對于檢測條件進行確定。最后采用內標法進行標準溶液的測定，并繪制出了相應的標準曲線。水產品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯質譜測定方法的主要優點就是靈敏度高、準確性好，能夠滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，具有很好的應用價值和實用性。
3 兩種檢測方法的比較分析
從這兩種檢測方法的檢測結果來看，都可以滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，因此都可以應用在水產品中丙酸睪酮殘留檢測過程中。但是水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法的前者準備工作比較復雜，而且實驗步驟較多，因此和液相色譜- 串聯質譜測定方法相比，具有浪費時間、難度大的缺點。但在實際的應用過程中，兩種檢測方法各有利弊，具體的方法的采用還應該根據實際的費用投入和檢測要求而進行確定，并在檢測過程中進行不斷地優化和改善。
4 結語
在一定條件下，水產品中丙酸睪酮可以很好的提高水產品飼養過程中的飼料的轉化率，促進水中動植物的生長，進而提高水產養殖的產量，提高經濟效益。但是如果水產品中的丙酸睪酮超過一定含量，那么就會對人體造成一定傷害，影響食品安全， 所以對于丙酸睪酮殘留的檢測方法還應該引起足夠的重視。
【參考文獻】：
[1] 田良良, 曹立民, 王建華, 徐杰, 林洪. 水產品中丙酸睪酮激素的同位素稀釋氣相色譜- 質譜法分析[J]. 中國漁業質量與標準. 2011(03) .
【關鍵詞】: 水產品 丙酸睪酮 殘留檢測 方法分析
1 水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法分析
1.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。
本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。
本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產品。
1.2 實驗方法分析
1. 樣品處理
取待測樣品均勻搗碎處理，于冷凍室存儲。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，加入工作溶液進行混勻，水浴十分鐘之后， 再冷卻至室溫，加入一定量的叔丁基甲醚，振蕩均勻，進行超聲處理，再進行離心處理，取上清液。
2. 凈化處理
取上清液于-80℃條件下靜置約20 分鐘，然后轉移至雞心瓶進行蒸發處理。再在殘留物中添加乙酸乙酯- 正己烷進行溶解，溶解完畢后再向其中分別加入丙酮和正丁烷3ml、6ml， 倒入固相萃取柱中，準備過柱。采用丙酮- 正己烷作為過柱液， 將洗脫液進行水洗兩次后，吹干。
3. 衍生化處理
取相應的衍生化試劑加入凈化處理后的殘渣中，混勻后進行超聲處理，然后烘干，加入正己烷進行定容之后，進行氣相色譜- 質譜分析。緊接著就是對于標準溶液進行衍生化處理。
4. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用甲醇溶液進行稀釋，將標準中間液的濃度分別稀釋成0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0μg/ mL，分別去定量按照衍生化處理的處理方法，進行GC 以及MS 測定。然后以配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應的標準曲線，并根據標準曲線計算出相應的回歸方程和相關的曲線系數。
5. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
1.3 結果與討論
本次實驗測定共經歷了樣品處理、凈化處理、衍生化處理、標準曲線繪制和結果出來分析等幾個主要階段。過程中采用配置的標準溶液的濃度為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標，繪制出相應的標準曲線具有一定的科學性。所選擇的回收率、精密度的計算方法也具有很好的說服力和可信度，從實驗的結果來看，水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法基本可以滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，又有很好的可行性。
2 水產品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯質譜測定方法分析
2.1 實驗材料
本次試驗采用的實驗材料主要包括三大類，分別是實驗試劑、實驗溶液和實驗樣品，以下將作簡要分析。
本次試驗采用的主要試驗試劑如下：純度≥ 97% 的丙酸睪酮；純度≥ 97% 的諾龍-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。本次試驗采用的主要食鹽溶液有100μg/mL 的丙酸睪酮標準貯備溶液、諾龍-D3 內標貯備液和衍生化試劑、飽和氯化鈉溶液等等。本次試驗的主要實驗樣品為褐牙鲆、凡納濱對蝦、小黃魚等水產品。
2.2 實驗方法分析
1. 樣品前處理
將實驗所選擇的樣品中的魚類的肌肉組織進行搗碎后均勻攪拌，在低溫條件下儲藏。先稱取5.00g 樣品于50ml 離心管中，再加入一定量的標準工作溶液和叔丁基甲醚之后，進行混勻、超聲處理、振蕩處理、離心處理，然后取上層清液分別轉移到梨形瓶之中，蒸發吹干。然后進行復溶、冷凍、再離心，離心處理之后準備進行液相色譜- 串聯質譜測定分析。
2. 標準曲線的繪制
在保證一定精確性的前提下，取一定量的標準中間液丙酸睪酮與容量瓶中，然后再用乙腈-0.1% 甲酸水溶液進行稀釋， 將標準中間液的濃度分別稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100ng/ml，另外在每一個標準溶液中還要加入一定量的20 ng/mLNT-D3 作為內標的在一定條件下進行液相色譜- 串聯質譜測定。然后以標準中間液的濃度作為橫坐標，以丙酸睪酮與內標衍生物的定量離子峰面積比值的平均值為縱坐標， 繪制標準曲線，并根據標準曲線計算出相應的回歸方程和相關的曲線系數。
3. 計算回收率、精密度以及確定最低檢測限
4. 丙酸睪酮的飛行時間質譜定性測定
采用1.0 μg/mL 丙酸睪酮標準溶液對LC-MS QTOF 進行碰撞能量、錐孔電壓、等質譜條件和流動相組成及梯度等色譜條件進行研究，并確定丙酸睪酮的飛行時間質譜測定信息。
2.3 結果與討論
本次試驗檢測過程中，在HPLC/MS QTOF 色譜質譜檢測的基礎上進行了優化處理，然后通過丙酸睪酮的飛行時間對于檢測條件進行確定。最后采用內標法進行標準溶液的測定，并繪制出了相應的標準曲線。水產品中丙酸睪酮殘留的液相色譜- 串聯質譜測定方法的主要優點就是靈敏度高、準確性好，能夠滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，具有很好的應用價值和實用性。
3 兩種檢測方法的比較分析
從這兩種檢測方法的檢測結果來看，都可以滿足實際水產品的檢測以及監控的基本要求，因此都可以應用在水產品中丙酸睪酮殘留檢測過程中。但是水產品中丙酸睪酮殘留的氣相色譜- 質譜測定方法的前者準備工作比較復雜，而且實驗步驟較多，因此和液相色譜- 串聯質譜測定方法相比，具有浪費時間、難度大的缺點。但在實際的應用過程中，兩種檢測方法各有利弊，具體的方法的采用還應該根據實際的費用投入和檢測要求而進行確定，并在檢測過程中進行不斷地優化和改善。
4 結語
在一定條件下，水產品中丙酸睪酮可以很好的提高水產品飼養過程中的飼料的轉化率，促進水中動植物的生長，進而提高水產養殖的產量，提高經濟效益。但是如果水產品中的丙酸睪酮超過一定含量，那么就會對人體造成一定傷害，影響食品安全， 所以對于丙酸睪酮殘留的檢測方法還應該引起足夠的重視。
【參考文獻】：
[1] 田良良, 曹立民, 王建華, 徐杰, 林洪. 水產品中丙酸睪酮激素的同位素稀釋氣相色譜- 質譜法分析[J]. 中國漁業質量與標準. 2011(03) .
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