老瓜頭生物總堿對佐劑性關節(jié)炎大鼠血清中細胞因子及NO的影響

【摘要】  目的 觀察老瓜頭生物總堿對佐劑性關節(jié)炎大鼠血清中白細胞介素-1 (IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)含量的影響。方法 采用弗氏完全佐劑(CFA)制備大鼠佐劑性關節(jié)炎(AA)模型，用放射免疫方法檢測大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量;用硝酸還原法檢測大鼠血清中NO的含量。結果 與正常對照組相比，模型組大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量升高，IL-4、IL-10含量降低(P<0.05或P<0.01)。與模型組相比，老瓜頭生物總堿能夠降低佐劑性關節(jié)炎大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量，升高IL-4、IL-10含量。結論 老瓜頭生物總堿的抗炎作用可能與下調致炎因子(IL-1β、TNF-α、NO)，上調抗炎因子(IL-4、IL-10)有關。

【關鍵詞】  老瓜頭生物總堿;佐劑性關節(jié)炎;白細胞介素-1β;腫瘤壞死因子;白細胞介素-4;白細胞介素-10

             老瓜頭(Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski)系籮摩科鵝絨藤屬多年草本生植物，別名牛心樸子，廣泛分布于次生沙漠中的半固定沙丘和荒漠流沙區(qū)。近年來，國內研究表明其化學成分除含有一些無機元素外，還含有生物堿、揮發(fā)油、甙類、黃酮醇類、糖類等化合物。老瓜頭提取物有抗炎、抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰、平喘等作用[1]。老瓜頭生物總堿(Total Alkaloid of Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski, TACKI)是從老瓜頭中提取的生物總堿，具有抑制蛋清致大鼠足趾腫脹、大鼠棉球肉芽腫以及角叉菜膠誘導的大鼠氣囊滑膜炎等抗炎作用[2]。本研究以大鼠佐劑性關節(jié)炎(Adjuvant Arthritis, AA)為模型，觀察TACKI對大鼠佐劑性關節(jié)炎血清細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO的影響。

　　1 材料與方法歷史論文發(fā)表

　　1.1 實驗動物 Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清潔級，體重150～200g，由寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號為SCXK(寧)2005-0001。隨機分組，常規(guī)飼養(yǎng)，自然晝夜。

　　1.2 實驗儀器 大鼠足容積測試儀，自制; UV/9100紫外可見分光光度計(北京瑞利分析儀器公司); GC1200型γ計數器(中國科技大學中佳光電儀器公司)

　　1.3 實驗藥品與試劑 老瓜頭生物總堿(寧夏回族自治區(qū)物理研究所分析測試中心孟協(xié)中研究員提供)，雷公藤多苷片(上海醫(yī)科大學紅旗制藥廠，批號040102，10mg/片)，弗氏完全佐劑(complete Freund’s adjuvant, CFA;美國Sigma公司，批號Lot084k8928)，TNF-α、IL-1放免試劑盒購自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所;IL-4、IL-10放免試劑盒購自北京北方生物技術研究所;NO硝酸還原法檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

　　1.4 方法

　　1.4.1 大鼠佐劑性關節(jié)炎模型(Adjuvant Arthritis, AA)制備 按照文獻[3]方法，除正常對照組外，其他各組大鼠右后足常規(guī)消毒后，于足跖皮內注射CFA 0.1mL致炎。

　　1.4.2 分組及給藥方法 大鼠隨機分為6組，每組10只。(1)正常對照組;(2)模型對照組均給予生理鹽水灌胃;(3)雷公藤多苷組將雷公藤多苷片研成細末，加生理鹽水，配制成混懸液(6.0mg/kg);(4)TACKI高、中、低劑量組(20.0、10.0、5.0mg/kg)，用生理鹽水配制，放置1d使其充分溶解，以上藥物均以10mL/kg灌胃，每天1次，于致炎后第19天開始給藥，連續(xù)8d。

　　1.5 血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO含量的測定 按照試劑盒說明操作。

　　1.6 統(tǒng)計學方法 實驗結果以(±s)表示。應用SPSS 11.5軟件進行統(tǒng)計學處理，多樣本均數間比較采用One-Way ANOVA檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

　　2 結果

　　2.1 TACKI對AA大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明顯高于正常對照組 (P<0.01);中、高劑量組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量均低于模型組(P<0.05或P<0.01)，與雷公藤多苷組相當(P>0.05)，且接近正常對照組水平(P>0.05)，見表1。

　　2.2 TACKI對AA大鼠血清IL-4、IL-10含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清IL-4、IL-10含量降低，高劑量組大鼠血清IL-4、IL-10含量高于模型組(P<0.05 或P<0.01)，見表1。

　　2.3 TACKI對AA大鼠血清中NO含量的影響

　　CFA致炎后27d，模型組大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高劑量組大鼠血清中NO含量明顯低于模型組(P<0.01)，其高劑量組低于雷公藤多苷組(P<0.05)， 接近正常對照組水平(P>0.05)，見表1。表1 TACKI對AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10、NO含量的影響

　3 討論

　　近年研究表明，細胞因子網絡的失調在類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA)的發(fā)病過程中占有重要地位[4]，具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正負反饋的免疫調控作用[5]。本實驗結果顯示，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量升高，IL-4、IL-10含量降低，提示AA大鼠病變過程中存在細胞因子網絡平衡失調，表現為致炎因子的升高和抗炎因子的減少。TACKI中、高劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量降低， TACKI高劑量組大鼠血清中IL-4、IL-10含量升高。提示TACKI發(fā)揮其抗炎作用可能與通過下調致炎因子(TNF-α、IL-1β)、上調抗炎因子(IL-4、IL-10)，調節(jié)AA大鼠血清中細胞因子的平衡有關。

　　關節(jié)炎大鼠的多發(fā)性關節(jié)病即與NO的過量產生有關[6]， NO可以促進巨噬細胞釋放IL-1、TNF-α形成惡性循環(huán)而增加RA的臨床癥狀，因此，減少NO可以減輕關節(jié)損傷。本實驗結果顯示，CFA致炎后27d模型組大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高劑量組能夠降低大鼠血清中NO含量，且其高劑量組大鼠血清中NO含量與雷公藤多苷組相當[7]，接近正常對照組水平。提示TACKI發(fā)揮抗炎作用可能與其抑制細胞NO的合成有關。歷史論文發(fā)表

【參考文獻】
  1] 楊衛(wèi)東, 郝銀舉, 李紅兵, 等. 老瓜頭生物總堿鎮(zhèn)痛、抗炎作用的實驗研究[J]. 寧夏醫(yī)學院學報, 2005, 27 (3): 191-193.

　　[2] 鄭萍, 戴貴東, 楊衛(wèi)東. 老瓜頭生物總堿抗炎作用機制的的實驗研究[J]. 寧夏醫(yī)學院學報, 2006, 28 (2): 99-100.

　　[3] 徐叔云, 卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]. 第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 1991: 21.

　　[4] Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Role of cytokines in rheumatoid arthritis[J] .Annu Rev Immunol, 1996,14:397.

　　[5] 張義浜.類風濕性關節(jié)炎發(fā)病機制及其治療方法研究進展[J]. 細胞與分子免疫學雜志, 2005, 21 (suppl): 88-90.

　　[6] D.O.Stichtenoth. Notric oxide and inflammatory joint diseases [J].British Journal of Rheumatology, 1998, 37: 246-257.

　　[7] 何玨,肖誠,任海霞,等.雷公藤在類風濕關節(jié)炎模型中的研究進展[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志, 2006, 19 (9): 720-721.