槐定堿對急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影響

【摘要】  目的 研究槐定堿對急性心肌缺血大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)及NO的影響。方法 將SD大鼠隨機分為8組，每組8只，分別為正常對照組、假手術組、模型組、丹參組、硝酸甘油組、槐定堿2.5、5和10mg/kg劑量組。結扎左冠狀動脈前降支(LAD)制備大鼠急性心肌缺血模型，采用比色法檢測靜脈注射槐定堿各組血清中MDA、NO含量和SOD、GSH-PX活性。結果 與模型組相比，槐定堿2.5、5、10mg/kg組可降低急性心肌缺血大鼠血清MDA含量、升高SOD活性和NO含量(P<0.05或P< 0.01)。槐定堿5、10mg/kg組能升高GSH-PX活性 (P<0.05或P<0.01)。結論 槐定堿對急性心肌缺血損傷保護作用的機制可能與其清除氧自由基和抗脂質過氧化作用有關。

【關鍵詞】  槐定堿;急性心肌缺血;氧自由基文學論文發表

             槐定堿(Sophoridine，SR)是從豆科槐屬植物苦豆子中分離提純出來的一種生物堿。近年來發現槐定堿在減慢心率[1]、抗心律失常、抗病毒、抗炎、抗菌[2-3]、增強免疫及抗腫瘤等[4]方面有重要的藥理活性和應用前途。本研究采用化學比色法檢測大鼠急性心肌缺血時血清中丙二醛(MDA)含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性及一氧化氮(NO)含量，以探討槐定堿對大鼠急性心肌缺血損傷的保護作用及機制。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　雄性健康SD大鼠250～300g，由寧夏醫科大學實驗動物中心提供。 BL-420生物機能實驗系統(成都泰盟)，DH-140動物人工呼吸機(浙江)，721型分光光度計(上海)，槐定堿(純度96%)，寧夏紫金花藥業股份有限公司鹽池藥廠提供，批號021180;丹參滴注液(安徽華源生物藥業，批號05112501);硝酸甘油注射液(山西康寶生物制品股份有限公司，批號060501);氨基甲酸乙脂(上海化學試劑公司，批號20041023)。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，分別為MDA試劑盒(批號20060121)、SOD試劑盒(批號20060214)、GSH-PX試劑盒(批號20060217)、NO試劑盒(批號20060213)。

　　1.2 實驗方法

　　將SD大鼠隨機分為8組，每組8只，分別為正常對照組(給予等容量NS)、假手術組、模型組、丹參組(125mg/kg)、硝酸甘油組(0.3mg/kg)、槐定堿2.5、5和10mg/kg劑量組。采用股靜脈注射藥物，20 min后結扎左冠狀動脈前降支 (LAD)制備大鼠急性心肌缺血模型，假手術組LAD下只穿線不結扎。心肌缺血模型建立成功的標準：①肉眼觀察：心前區顏色變暗;②心電圖的改變：標準肢體Ⅱ導聯ST段抬高;③血流動力學指標的改變：心率減慢，動脈血壓下降，心臟收縮和舒張功能降低;④組織學改變：電鏡下可見線粒體損傷等心肌缺血的表現。缺血3h后靜脈采血，靜置30min后，離心(3000r/min,10min)取血清，分裝后置于-70℃冰箱保存。用比色法測定血清MDA含量、SOD活性、GSH-PX活性及NO含量。

　　1.3 統計學方法

　　實驗數據以均數±標準差(±s)表示，用SPSS 11.5軟件進行統計學處理。多組間比較采用One-Way ANOVA分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

　　2 結果

　　模型組大鼠血清中MDA含量明顯升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，槐定堿 2.5、5、10mg/kg各組均能降低血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量(P<0.05或P<0.01);槐定堿 10mg/kg組與兩組對照藥物相比對大鼠急性心肌缺血時血清MDA含量、SOD、GSH-PX活性及NO含量的影響差異無統計學意義。因此，槐定堿能降低大鼠急性心肌缺血時血清MDA含量，升高血清SOD、GSH-PX活性和NO含量。結果見表1。表1 槐定堿對急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影響

　　3 討論

　　近年來，隨著心肌缺血損傷機制研究的不斷深入，發現大量的氧自由基生成及脂質過氧化反應增強是心肌缺血損傷的主要機制之一[5]。氧自由基[即所謂活性氧:O-2(超氧化物陰離子自由基)、·OH(羥自由基)、過氧化氫等]是心肌細胞的正常代謝產物，可對機體產生損傷。但正常心肌組織含有抗氧化防御系統：SOD、CAT(過氧化氫酶)、GSH-PX、POD(過氧化酶)及VitC、E和硒等，可以清除或協助清除氧自由基，以保持氧自由基的生成和清除的動態平衡，使心肌細胞免受活性氧損害和維持正常生理功能。在各種疾病引發的心肌缺血過程中，機體內氧自由基的生成明顯增多，而對氧自由基的清除能力急劇下降，從而造成心肌組織中氧自由基的大量蓄積。氧自由基對心肌細胞的損傷機制是多方面的，主要包括對心肌細胞膜、DNA及線粒體的損傷。氧自由基能誘導心律失常、誘導細胞凋亡、激活轉錄因子、誘導基因表達等[6]。
　氧自由基與不飽和脂肪酸反應形成過氧化脂質，過氧化脂質進一步分解成MDA。MDA是脂質過氧化產物的典型代表，它不僅反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度，而且還影響了膜離子轉運機制，導致膜對Ca2+的通透性增高，能繼發性地引起細胞內鈣超載，而胞內鈣失衡是造成細胞壞死或凋亡的重要機制之一。因此通過降低脂質代謝產物MDA水平，可以直接或間接地減輕細胞的凋亡壞死。SOD是機體清除氧自由基的重要酶類，對機體的氧化和抗氧化平衡起到至關重要的作用。所以，通過提高SOD的活性，可以減輕細胞的的氧化損傷[7]。

　　GSH-PX是機體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異地催化還原型谷胱甘肽(GSH)對H2O2的還原反應，可以起到保護細胞膜結構和功能完整性的作用。GSH-PX與SOD等酶共同組成一個氧化有機氫過氧化物酶系，主要負責清除H2O2。這些酶能協同地防止活性氧損傷細胞膜，并且彼此之間相互保護。如這一系統中某一種酶活性下降或缺失，則會引起細胞受損或不可逆性損傷。

　　NO是一種由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成的難溶于水的非極性氣體(L-精氨酸+NADPH+O2→瓜氨酸+NO+NADP+)，因為它的分子結構中具有不配對電子，所以也屬于自由基。由于NO具有脂溶性，能通過生物膜快速擴散，因而在細胞間較廣泛地起作用。文學論文發表

　　綜上所述，本實驗模型組大鼠血清中MDA含量明顯升高，SOD、GSH-PX活性和NO含量明顯降低(P<0.01)，表明急性心肌缺血可產生氧自由基引起心肌損傷。實驗結果表明，槐定堿能提高心肌缺血大鼠血清SOD、GSH-PX活性及NO含量，增強了內源性氧自由基清除系統的功能，顯著減少血清脂質過氧化產物MDA的水平，減輕了氧自由基對心肌的損傷。各組雖然與假手術組比較各指標有所升高或降低，但與模型組比均有改善。提示槐定堿具有清除自由基和抗脂質過氧化作用，這可能是槐定堿保護缺血時心肌細胞損傷的機制之一。

【參考文獻】
  [1] 張紅梅，閆琳，李漢青. 槐定堿和氧化槐定堿對豚鼠心率的影響[J]. 寧夏醫學院學報, 1998, 20(4): 4-5.

　　[2] 黃秀梅,李波.六種苦豆子生物堿對炎癥介質的白三稀的影響[J]. 中成藥，2003，25(10):824-826.

　　[3] 楊志偉,周婭,曹秀琴. 苦豆子生物堿體外抗柯薩奇病毒的作用[J].四川中醫,2003,21(3): 14-16.

　　[4] 周炳剛,蘇剛,馬德強. 槐定堿誘導人胃癌MGC-803細胞凋亡的實驗研究[J].腫瘤,2003,23(3):197-199.

　　[5] 邢啟崇. 心血管病實驗診斷學[M]. 北京: 人民衛生出版社, 2004： 40-41.

　　[6] 周玖瑤，李銳，廖雪珍，等. 環維黃楊星D抗垂體后葉素致心肌缺血作用機理研究[J]. 廣州中醫藥大學學報, 2005, 22(6): 454-457.

　　[7] 孫平龍，尚云，衛新國，等. 黃芪保心湯對實驗性心肌缺血大鼠心肌組織MDA、SOD水平及心肌組織形態學的影響[J]. 上海中醫藥大學學報, 2000, 14(2): 38-40.