角膜移植后患者角膜新生淋巴管與新生血管和炎癥的關聯

【摘要】  目的：研究角膜移植后角膜新生淋巴管與新生血管和炎癥的關聯。方法：人角膜取自行二次角膜移植的患者19例。淋巴內皮細胞受體(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor, LYVE��1)和內皮細胞黏附因子��1(platelet endothelial cell adhesion modecule��1, PECAM��1)雙重免疫組化法標記角膜中的新生血管和淋巴管，進行淋巴管計數(lymphatic vessels counting, LVC)和血管計數(blood vessels counting, BVC)，比較BVC、炎癥指數(inflammation index，IF)、移植歷史(transplantation history, TH)與LVC之間的關聯。結果：角膜移植后BVC，IF與LVC間均呈顯著性正相關，而TH與LVC間呈顯著性負相關。角膜移植后新生淋巴管、血管、眼表炎癥間大致成平行發展，新生淋巴管最先退化，其次是眼表炎癥，新生血管最后消退。結論：人角膜移植后角膜新生淋巴管與新生血管、眼表炎癥之間存在著極為密切的關聯。

【關鍵詞】  角膜移植;新生淋巴管;新生血管;炎癥農業論文發表

　　AbstractAIM: To discuss the association of corneal hemangio�瞘enesis, corneal inflammation with corneal lymphangio�瞘enesis after human corneal transplantation.�rMETHODS: Nineteen human corneas were obtained from 19 patients undergoing a second corneal transplan�瞭ation from 2005 to 2008. Corneal hemangiogenesis and lymphangiogenesis were examined by lymphatic vessel endothelial hyaluroman receptor (LYVE��1) and platelet endothelial cell adhesion modecule��1 (PECAM��1) double immunohisto�瞔hemistry. The state of corneal inflamma�瞭ion was eva luat�瞖d by inflammation index (IF) grading. Then, the association of blood vessel counting (BVC), IF, corneal transplantation history (TH) with lymphatic vessel count�瞚ng (LVC) was examined.RESULTS: LVC was strongly and positively correlated with both BVC(r=0.725;P<0.01) and IF(r=0.661; P<0.01) in transplanted human corneas. However, LVC was significantly and inversely correlated with TH(r=��0.301; P<0.01). Although the development of corneal lymphangio�瞘enesis, hemangiogenesis and inflammation was parallel in general, corneal lymphangiogenesis disappeared followed by the inflammation of corneas and corneal blood vessels.CONCLUSION: Corneal lymphangiogenesis correlates closely with corneal hemangiogenesis and inflammation after human corneal transplantation.

　　�rKEYWORDS: corneal transplantation; lymphangiogene�瞫is; hemangiogenesis; inflammation

　0引言農業論文發表

　　角膜移植后存在著角膜新生淋巴管[1]。新生淋巴管可以加速角膜的抗原呈遞，破壞角膜的免疫赦免，從而加快免疫應答的發生[2]。角膜新生淋巴管有望成為抗移植排斥反應的新靶點。然而，目前對人角膜淋巴管的研究只限于通過鉆取角膜，組織切片后行電鏡檢查或組化染色標記后在顯微鏡下觀察，而無法在活體上觀察角膜新生淋巴管的生長情況，評估抗淋巴管治療的療效，極大地限制了該領域的發展。近年研究發現，在血管化角膜中，角膜新生血管和淋巴管呈平行發展[3];而Mouta等[4]的研究認為炎癥對角膜新生淋巴管的形成至關重要。既然角膜新生淋巴管和新生血管、炎癥之間可能存在著一定的聯系，而表1 再次角膜移植患者的情況±s(range)

　　原發病nIFTH病毒性角膜炎40.44±0.24(0.22～0.78)4.2±2.9(1.1～8.0)角膜變性40.44±0.24(0.11～0.67)3.6±1.6(1.3～4.1)眼外傷40.55±0.29(0.22～0.89)3.3±2.5(0.8～6.5)圓錐角膜40.39±0.22(0.11～0.56)3.9±2.6(1.5～7.0)大泡性角膜病變30.44±0.30(0.22～0.78)3.8±2.3(1.6～6.2)

　　圖1 LYVE��1 和PECAM��1免疫組化法標記人角膜中的新生血管和淋巴管(SABC×200) A1～A3：病毒性角膜炎移植史1.3a，角膜中無明顯的炎癥征象和淋巴管新生征象，但出現了角膜新生血管;B1～B3：病毒性角膜炎移植史1.6a，角膜中存在著大量的炎性細胞浸潤，且在出現了角膜新生血管的同時，出現了角膜新生淋巴管。

　　后兩者又極易通過裂隙燈觀察，我們能否通過檢測其與角膜新生淋巴管間的關聯，從而間接評估角膜移植后的角膜新生淋巴管呢?目前有關這方面的研究國內外均未見報道。

　　1對象和方法農業論文發表

　　1.1對象 病變角膜來自2005年在中山大學中山眼科中心行二次角膜移植的患者19例。所有患者在首次角膜移植前均未出現角膜新生血管。角膜移植史<1a者1例，1～2a者6例，2～5a者8例，>5a者4例(表1)。每個患者均被告知試驗程序并簽署知情同意書，所有程序均遵循Helsinki原則。正常對照為擬用于角膜移植的3只正常供體角膜。

　　1.2方法 鉆取角膜組織后，快速沿直徑方向從鼻側向顳側分成兩半，40g/L中性甲醛液中固定24h，制備角膜蠟塊后，作4μm厚連續切片，每個蠟塊切40張，采用SABC法進行染色，一抗分別為小鼠抗人LYVE��1、mAb小鼠抗人PECAM��1 mAb(R&D systems, MN,USA)，二抗為生物素化兔抗小鼠IgG，DAB顯色，蘇木素復染，顯微鏡下觀察，棕褐色管腔者為陽性。PECAM��1(+)LYVE��1(��)的管腔為角膜新生血管，而PECAM��1(+)LYVE��1(+)的管腔為角膜新生淋巴管。LVC和BVC為所有切片中的數目總和后